月季“月月红”酵母单杂交cDNA文库及RrMYB7诱饵载体的构建

【摘要】转录因子通过激活或者抑制基因的转录表达来调节植物体内的各种生理生化过程,植物中包含许多的转录因子家族,MYB基因家族就是其中一类。多年来人们对植物体内的MYB转录因子进行了大量的研究,分析其蛋白的结构及功能,现有研究表明MYB蛋白在植物生长发育的多个阶段包括植物次生代谢、植物细胞形态建成以及植物抗逆胁迫应答等方面都起着重要作用。目前,对MYB转录因子的研究大部分还停留在分析其生理功能或单个MYB基因的作用方面,对于MYB蛋白调控网络的研究、MYB基因家族成员间的互作以及MYB基因与其它转录因子家族之间的作用机制还缺乏了解。探讨多个基因甚至整个MYB家族基因间的复杂调控网络有助于在整体水平上利用MYB基因对植物进行定向改良,这将成为今后对MYB基因家族的研究重点。为了探索MYB基因家族的复杂调控网络,可以运用酵母双杂交及酵母单杂交技术来找寻MYB蛋白及MYB基因启动子的互作蛋白编码序列。我们选择可能与植物生长与开花相关的MYB基因家族成员MYB7作为研究对象,以周年开花不断的蔷薇科植物“月月红”(Rosachinensis’Slater’scrimsonChina’)作为植物材料,构建了“月月红”酵母单杂交cDNA文库和MYB7酵母双杂交诱饵载体PGBKT7-MYB7,并运用FPNI-PCR方法扩增出MYB7基因上游1.86kb长度序列,为后期的酵母单杂交和酵母双杂交cDNA文库筛选工作做出铺垫。具体实验内容与结果如下：1.以实验室基地大棚的“月月红”花瓣与花芽为植物材料构建“月月红”酵母单杂交cDNA文库,通过检测此文库的转化效率及插入片段长度来评价文库质量。此文库转化效率为1.4×106,插入片段长度为800bp-1000bp之间,有少数自连及多片段插入情况。2.以实验室已构建好的MYB7超量表达载体PMV.RrMYB7质粒为模版,克隆玫瑰MYB7基因cDNA序列全长,根据PGBKT7诱饵载体选择NcoI和BamHI酶切位点,设计引物构建酵母双杂交诱饵载体PGBKT7-MYB7,将构建好的诱饵载体转化Y187酵母菌株,挑取阳性克隆并保存。3.用新的染色体步移法FPNI-PCR方法扩增MYB7上游序列,希望扩增出MYB7基因启动子。此实验部分共进行了三轮FPNI-PCR扩增反应,对每轮的测序结果进行检测确认,将三次得到的序列进行拼接后得到MYB7基因上游1.86kb长度序列。
【作者】胡丹；
【导师】宁国贵；
【作者基本信息】华中农业大学，林学，2014，硕士
【关键词】“月月红”；MYB转录因子；酵母双杂交；酵母单杂交；FPNI-PCR；

【参考文献】
[1]闫锐.以聚（N-异丙基丙烯酰胺）作为结构导向剂制备多孔二氧化硅及其在催化反应中的应用[D].南开大学,高分子化学与物理,2012,硕士.
[2]范丽君.办税服务区标准化建设问题研究[D].内蒙古大学,公共管理,2014,硕士.
[3]孙杰.证券市场“异象”理论述评[J].市场周刊.财经论坛,2004,05:50-52.
[4]庞雪.吸烟者的香烟渴求感与冲动性行为关系研究[D].西南大学,应用心理学,2014,硕士.
[5]肖利平.含盐有机废水厌氧生物处理的试验研究[D].湘潭大学,环境工程,2003,硕士.
[6]钮洋,刘清海,杨娟,高东亮,秦校军,罗达,张振宇,李彦.水溶液中碳纳米管的表面增强拉曼光谱研究[J].化学学报,2012,14:1533-1537.
[7]张楠.论美国对外国投资安全审查的法律制度[D].复旦大学,法律,2012,硕士.
[8]孙兴湄.基于生态足迹理论的山地旅游空间结构优化研究[D].成都理工大学,旅游管理,2013,硕士.
[9]魏鑫,郭建胜,代旻.OLAP和数据挖掘一体化的航空维修信息分析系统[J].微机发展,2003,S1:47-49.
[10]李超.作为媒介仪式的春节联欢晚会[D].北京大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[11]杨彦.北京市老年人力资源开发研究[D].首都经济贸易大学,2004.
[12]沈艳燕.The Language and Silence of Tillie Olsen[D].浙江大学,英语语言文学,2004,硕士.
[13]杨捷.大学生情绪智力、心理韧性与应对方式的关系研究[D].河北大学,发展与教育心理学,2014,硕士.
[14]朱江峰.汽车牌照自动识别系统的研究[D].南京航空航天大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[15]荣婧陶.基于生活化的思想品德课教学探究[D].渤海大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[16]刘德忠.论校园文化建设[D].东北师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[17]王晓艳.中国电视剧化妆造型审美特征分析[D].上海戏剧学院,戏剧戏曲学,2013,硕士.
[18]刘楠.pH响应超支化聚丙烯酰基乙二胺的制备及其应用[D].河北大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[19]陈微微,陈芳.基于“循环互动”模型的高校文科类专业实践教学体系构建[J].教育理论与实践,2012,18:9-11.
[20]袁娜.HS水泥集团资金集中管理改进研究[D].湖南大学,会计,2014,硕士.
[21]姚长利,管志宁,黄卫宁.位场转换的抽样分组法[J].石油地球物理勘探,1997,05:696-702+723-750.
[22]张颖为.无惩罚无滤子SLQP算法的全局收敛性[D].苏州大学,运筹学与控制论,2014,硕士.
[23]程淑杰.宁夏中部干旱带土地利用生态安全格局研究[D].宁夏大学,人文地理学,2014,硕士.
[24]陈力航.IL-18,IL-33对Th1,Th2细胞因子的表达调控在原发免疫性血小板减少症发病中的作用[D].复旦大学,临床医学（专业学位）,2013,博士.
[25]季现莹.几种萤火虫生殖生理研究[D].华中农业大学,农业昆虫与害虫防治,2014,硕士.
[26]郭湧.锚索变角度加固技术在边坡中的应用[D].西安科技大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[27]徐曦.儒家文化价值观对消费者购买行为模式影响研究[D].山东大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[28]王芳.汉译《全体通考》在华传播的文化研究[D].四川外国语大学,英语语言文学,2014,硕士.
[29]任晓远.熟悉程度、学科性质与认知风格对超文本学习绩效的影响[D].山东师范大学,应用心理（专业学位）,2013,硕士.
[30]王丽娇.企业业绩评价文献述评[D].东北大学,会计学,2010,硕士.
[31]欧亿容.高等农业院校教育资源利用及办学经济效益研究[D].湖南农业大学,种植,2003,硕士.
[32]王晓阳.信托财产独立性研究[D].宁波大学,法律,2014,硕士.
[33]李欢娣.《奥利安娜》不确定性的内在性的研究[D].南京师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[34]唐子茜,曹勇.网络社会心态的特征及调适对策[J].北京交通大学学报(社会科学版),2015,01:132-136.
[35]成跃进.大容量多媒体通信卫星[J].空间电子技术.1999(02)
[36]徐伟,楼钦钦,魏无际?,秦占芬.雌二醇短期暴露对非洲爪蟾性腺和输卵管形态及性二态基因表达影响的初步研究[J].生态毒理学报.
[37]胡佩.基于ANN方法的股票预测模型[D].重庆大学,应用统计（专业学位）,2014,硕士.
[38]李勇达,张超,孟令君.基于头部姿态特征的列车司机疲劳驾驶检测系统研究[J].交通信息与安全,2014,05:114-119.
[39]王雪皎.英汉“时”“体”的对比及教学策略[D].吉林大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[40]张定均.计算机局部网络——第三讲环形局部网络[J].冶金自动化,1988,06:52-56.
[41]何融,韩琦,顾彦,杨坤,蔺磊,郑强.电动助力转向系统永磁同步电机噪声分析及改进[J].上海汽车,2015,03:14-19.
[42]袁一平.社会发展与人的全面发展研究[D].北京交通大学,2014.
[43]王宜君.“野葫芦引”的西南联大镜像[D].华中师范大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[44]郭巍.浙江SC电器有限公司发展战略研究[D].浙江工业大学,2013.
[45]李士一.轮轨接触表面微裂纹扩展研究[D].西南交通大学,工程力学,2013,硕士.
[46]马育红,张先宏,杨万泰.聚合物基复合介电材料的研究进展[J].北京化工大学学报(自然科学版),2015,03:1-15.
[47]章四兵.基于相似度量的机械产品系统的分类方法研究[D].合肥工业大学,机械电子工程,2004,硕士.
[48]石峰.绿色生产力的形成与发展探析[D].东北大学,科学技术哲学,2009,硕士.
[49]张鸽.论恩格斯的家庭观[D].吉林大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[50]张召.预切槽法开挖黄土隧道地层变形规律及掌子面稳定性研究[D].北京交通大学,2014.